为建立一种用SYBR Green I荧光染料检测PK15细胞α干扰素(αIFN)效应因子Mx1、OAS的mRNA表达水平的qPCR检测方法,通过在猪圆环病毒2型(Porcine Circovirus Type 2, PCV2)抑制αIFN发挥效应的信号通路中进行初步应用。根据GenBank中目的基因的序列,利用分子生物学软件Premier 5.0在其保守区设计并合成相应的特异性引物。利用TRIzol法提取总RNA,经Oligo d(T)15进行反转录,利用PCR扩增各段目的基因,并克隆至pMD 18T载体,转化大肠杆菌DH 5α,经鉴定为阳性的重组质粒作为标准品模板建立SYBR Green I qPCR标准曲线和溶解曲线,并进行灵敏性、特异性和重复性试验。根据建立的实时qPCR方法,检测PCV2对αIFN效应因子的抑制效果。对建立的PK15细胞αIFN效应因子SYBR Green I qPCR方法进行分析,结果表明Mx1、OAS和内参βactin基因的Ct值与标准品稀释度在1×101~1×108 copies/μL的范围分别呈良好的线性关系。PK15细胞在接种PCV2,并受到αIFN刺激后Mx1、OAS的相对表达量较未接种PCV2明显降低。本试验建立了PK15细胞αIFN效应因子的qPCR检测方法,为在mRNA水平上对PK15细胞αIFN效应因子的定量分析奠定了基础,并成功地初步应用于PCV2抑制αIFN发挥效应的信号通路研究中。